2022年11月30日，第五期「病理质控大家谈」栏目，邀请了中南大学湘雅二医院病理科李代强教授，中南大学湘雅二医院病理科技术部副组长谭红博士从病理诊断和技术质控，结合实际病例分享，为我们带来《免疫组化对淋巴瘤诊断的重要性》、《淋巴瘤免疫组化质量控制要点》的主题分享。

李代强教授从淋巴瘤特点及病理学诊断、免疫组化对淋巴瘤病理诊断的意义、淋巴瘤免疫组化检测难点及案例分享3个方面进行了详细的介绍。课程中，李教授详细介绍了淋巴瘤分类中常用的免疫组化抗体检测，预后指标CD5、CD30、Ki-67以及靶向治疗相关靶点。他指出，由于淋巴组织的独特结构、淋巴细胞具有较强的异质性，淋巴瘤诊断复杂且分型不断变化，因此合适的抗体试剂及检测浓度对于染色结果的质量控制和淋巴瘤诊断至关重要。相较于鼠单克隆抗体，湘雅二院目前使用的百凌生物的兔单抗具有更强的亲和力、更高的特异性和灵敏度，染色背景干净清晰。

谭红博士从免疫组化分阶段质控管理、免疫组化各阶段的质量要点、常见的外对照的作用这3个方面内容进行了介绍。谭红博士在课程中指出，免疫组化涉及的步骤繁多，应当对各步骤设置质控要点。免疫组化流程可大致分为前处理、染色、判读三个方面。技术组主要为前处理和染色这两个阶段设置好步骤标准用于控制染色质量。在此过程中，使用液态细胞质控品等外对照能够有效监测染色过程是否偏离标准，确保染色质量满足判读需求。

问答环节

Q1：请问李代强主任，您认为淋巴组织增生性病变诊断的关键点有哪些，或者有哪些靶标是必检项？

A：淋巴组织增生性病变无论是良性增生还是恶性增生，首先主要看形态学，形态学主要看结构的完整性。淋巴结具有独特的结构，包括淋巴窦、滤泡、皮质区、副皮质区等，结构的完整往往代表是正常或反应性的，若结构有破坏则代表是肿瘤性。还有一种情况是，淋巴结没有明显的破坏但结构是紊乱的，这种情况可能是肿瘤性的也可能是反应性的。所以，对于淋巴结结构的判断是诊断是不是淋巴瘤，最重要的观察形态学改变。

第二点，主要是看细胞形态。一是有没有异形淋巴细胞的出现，特别是大细胞淋巴瘤往往有明显的细胞形态的异常。二是看淋巴细胞形态的异质性，如果它是一个异质性不大但表现出细胞形态的异质性，往往也提示我们可能是淋巴瘤。所以结构的破坏、异形淋巴细胞的出现、异质性的淋巴细胞的出现都提示可能是淋巴瘤。这种情况下则需要进一步通过免疫组化帮助进行诊断与分类。

过去免疫学靶标的选择有四项基本原则：CD3、CD2、Ki-67、CD21。现在来讲，4项远不够诊断淋巴瘤，更不够对淋巴瘤进行分型。一般T细胞至少检测2项以上：CD3、CD5、CD43等。B细胞也需至少监测2项：CD20、PAX5、CD79α。其他，根据怀疑是什么淋巴瘤进行相应的选择。一般需检测10项及以上，有些甚至有20项。随着现在淋巴瘤分型越来越细化、复杂化，所需要监测的靶标也越来越多。此外，EBER的监测对淋巴瘤也是非常重要的，这对诊断和分型有很大帮助。

Q2：李主任您好，对于多种形态的淋巴瘤免疫组化染色结果判读，往往会存在因主观性影响存在的差异和影响，是否可以分享您单位对于多形态淋巴瘤的判读心得？

A：多形态淋巴瘤的形态学和免疫组化诊断都比较困难且复杂，要判断好的前提是免疫组化染色片要好、要清晰。要做到好的免疫组化染色片，质控、全流程管理、临床医生取材这几个方面都需要注意。

之后，避免出现误判需要注意：第一，诊断医生要熟悉淋巴结结构，正常和反应性增生发生的改变、破坏的情况。如果不熟悉结构和结构的改变，判读时就有可能出现误判。比如，有区域应该是T细胞，若出现大量B细胞，即使没有异形也要怀疑是淋巴瘤，因为在不该出现的区域出现异常的细胞。第二，要寻找内对照。在制片过程中外对照很重要，但是在HE或者没有外对照的情况下，内对照可以用于判断免疫组化染色情况怎么样，染色是否可以，或者发现是否出现不该出现的强弱或者百分率以及异位的表达。第三，要熟悉抗体该在淋巴结哪些区域表达，要熟悉抗体性质及染色特点等。

Q3：李主任您好， 请问哪些类型的淋巴瘤中你认为有必要对CD30进行检测？

A：随着对CD30的认识的深入，发现它不单和淋巴瘤诊断分型有关，也与淋巴瘤的治疗有关，因为有靶向药来针对淋巴瘤的治疗。因此有很多肿瘤，需要进行CD30的检测。其中包括：经典型霍奇金淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、部分弥漫大B细胞淋巴瘤（部分可表达CD30阳性，而且临床预后比较好）、部分皮肤T细胞淋巴瘤（特别是皮肤间变性大细胞淋巴瘤，CD30阳性率很高）、NKT细胞淋巴瘤。

淋巴结出现CD30阳性细胞增多，是否可以判读绝对是淋巴瘤？那也不一定。有一些反应性病变也可能出现CD30阳性，特别是病毒性感染疾病。所以在诊断淋巴瘤中，淋巴细胞比较大的，判读的时候也需注意与非肿瘤性（反应性病变）相鉴别。

Q4：请问一下谭红老师，看到很多伴随诊断的抗体也是兔子种属的，请问您这里用过的兔单克隆抗体是普遍染色效果优于鼠吗？

A：兔单抗的出现带来了很多好处。兔单抗通常具有较高的亲和力，比鼠单抗识别更多种类的抗原表位。一些研究发现兔单抗能在不降低特异性的前提下，提高检测灵敏度。与鼠单抗相比，对相同的目标蛋白，可以获得更清晰的免疫组化染色，使得石蜡切片上的背景也大大降低。我们实验室的经验也是这样的，因此购买抗体的原则，选择优先级先后顺序是：兔单抗、鼠单抗、兔多抗。

Q:谭红老师您好，怎么才能尽量降低或者避免淋巴组织的独特结构和细胞异质性对免疫组化的结果的影响？

A：这种情况其实很难避免。如果非要建议的话，一是从诊断医生的角度，如果考虑病变是淋巴组织反应性增生（良性），诊断医生尽可能选择淋巴组织各结构完整、全的组织来进行免疫组化检测；若考虑淋巴瘤的话，则选取细胞形态比较一致的代表性的组织来制作免疫组化。从技术人员的角度，其在制片过程中，则要严格把控制片质量，制作优质的免疫组化切片，来帮助病理医生进行诊断。